全波长酶标分析仪检测方案 实验结果更稳定

【一、生命科学实验检测背景与需求】

生命科学领域快速发展, 生物医药领域快速发展, 食品安全领域快速发展, 在此情况下, 实验室对检测仪器的精度提出了更高要求, 对其稳定性提出了更高要求, 对其多波长适应性提出了更高要求。传统的固定波长酶标仪, 在面对血清这种复杂样本时, 往往会出现数据偏差, 或者需要多次重复实验, 原因在于其光谱覆盖范围窄, 无法灵活选择检测波长, 细胞上清液这种复杂样本也是如此, 食品提取液这种复杂样本同样如此。尤其是在酶联免疫吸附试验叫这类应用场景里, 也就是ELISA, 其具体名为酶联免疫吸附试验, 还有蛋白质定量分析这种情况以及药物筛选等相关场景当中, 诸如《中国药典》2020年版四部通则这般的行业标准, 明确要求酶标仪要一并具备波长扫描功能, 目的在于以此来保证检测结果的真实性以及可追溯性, 确保那检测结果真实以及可追溯。在当下, 实验室广泛面临的挑战涵盖了这些方面: 样本基质干扰程度极大, 仪器重复性欠缺不足, 没办法支持多项目迅速切换。所以这样一来, 一款拥有宽波长范围, 具备高重复性以及自动化数据处理能力的全波长酶标分析仪, 就成为了提高实验效率与提升数据质量的关键工具。

 

【二、实验所需仪器与试剂】

核心仪器：莱恩德全波长酶标分析仪 LD-QM10

身为本次实验方案里核心仪器的, 是莱恩德LD - QM10型全波长酶标分析仪。这仪器把原装进口光栅用作分光元件, 其波长涵盖330 - 1000nm, 它对于终点法、动力学、抑止率以及单/双/多波长测量模式全都予以支持, 它还拥有光谱扫描功能, 能够针对酶标板当中的微孔, 实施全波长扫描。其关键配置具备优势之处在于, 光路系统采用全封闭设计, 有效地降低了杂散光干扰, 于此长期稳定性≤±0.002Abs, 重复性CV≤0.2%, 以此确保实验数据拥有高信噪比。该仪器配备8吋彩色液晶触摸屏以及专业软件, 能够存储500组以上程序以及超过10000个样本结果, 还支持吸光度、线性方程、对数方程等多种计算模式。在实验里头, LD-QM10可以给各类ELISA反应供应准确的波长匹配, 像是在450nm的波长处测定OD值, 又或者是在630nm的波长处测定OD值, 与此同时, 借助光谱扫描功能来辅助识别样本特异性吸收峰, 从而极大地提升实验灵活性。

配套试剂与耗材

各种试剂都要符合分析纯的等级标准, 消耗材料必须确保不存在DNase/RNase污染, 从而防止背景产生干扰。

 

【三、标准实验操作方法】

样品前处理

血清或血浆样本情况下, 采血后要以3000rpm的转速进行10分钟的离心操作, 之后收取上清液, 再分装到EP管里, 要防止反复冻融。要是细胞上清, 那就得通过0.22μm滤膜过滤，以此去除细胞碎片。食品提取液需依据GB/T 5009系列相关标准来进行均质、萃取以及稀释, 要保证pH值被调节到7.0 - 7.4。

仪器准备与设置

致使莱恩德LD-QM10全波长酶标分析仪开启, 预热十五钟达光源稳定状态。于触摸屏之上挑选“终点法”检测模式, 按照试剂盒说明书去设定检测波长（像450nm这样）以及参考波长（比如630nm）。进入“光谱扫描”菜单, 将扫描范围设置成303-1000nm, 步长为1nm, 用来以便后续对样本吸收曲线予以分析。提出这样的建议, 那就是把振板强度设定为2级, 可以将振板时间设置成10秒, 此做法是为了保证孔内反应液能够混合得均匀。

实验操作步骤

参照ELISA试剂盒的说明, 先往酶标板里头依次加入100μL包被抗体, 接着在4℃的环境下做好孵育, 使其持续一夜。等到第二天时, 进行3次洗涤操作之后, 加入200μL封闭液, 于37℃温度下实施封闭, 时长为1小时。之后再次洗涤, 再去加入100μL待测样本, 在37℃的条件下孵育30分钟。终再次洗一洗, 加入100μL酶标抗体, 同样在37℃孵育30分钟。而后添加100μL TMB显色液, 于避光状况下反应15分钟, 往每孔之中加入50μL终止液。即刻把酶标板放进莱恩德LD-QM10, 点击“开始检测”, 仪器会自动读取各孔的OD值。

数据采集与处理

完成检测之后, 软件会直接生成吸光度的数据表格。要是进行光谱扫描, 那么可导出波长与吸光度的曲线。借助软件内置的四参数拟合或者线性回归功能, 能够自动计算样本的浓度。实验建议每批设置少3个复孔, 并且要包含空白对照以及标准品孔, CV值控制在5%以内的话才被视为合格。

 

【四、实验结论与方案优势】

基于莱恩德LD-QM10全波长酶标分析仪, 得出了本实验方案；此实验方案验证了该仪器于标准ELISA流程里的可靠性以及高效性。实验结果显示, 该仪器在0.000至3.000Abs线性范围之内的示值误差小于或等于±0.01Abs；其重复性CV小于或等于0.2%；稳定性小于或等于±0.002Abs；这全部满足《中国药典》以及ISO 17025对酶标仪的性能要求。其核心优势在于, 全波长扫描功能能够快速定位优选检测波长, 避免传统滤光片式仪器波长固定的局限, 光栅分光系统拥有低杂散光特性, 确保高浓度样本的检测精度, 智能化软件支持一键完成数据拟合与质控评价。对于行业用户来讲,这个方案能够明显提升实验效率, 这里的单板检测时间被缩短到1分钟以内。它还能够降低运维成本, 因为采用了光路免维护设计。并且它能助力实验室较为轻松地满足多项目切换需求, 特别适宜疾控中心、药企研发以及第三方检测机构去使用。

 

【五、参考文献/相关标准】

1. 《中国药典》二零二零年版四部通则零四零六, 酶标仪性能验证。

2. 采用GB/T 5009系列标准的, 是作为食品安全国家标准范畴内的理化检验方法。

3. ISO 17025 检测和校准实验室能力的通用要求

4. 行业内, 关于技术方面的文献, 名为ELISA实验操作规范, 以及质量控制指南（2021这个版本）。